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高效毛細管電泳法同時測定牛樟芝中5種核苷類成分的含量

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2017-09-20 張奉蘇 生物技術與健康快訊

牛樟芝( Antrodia camphorata) 又稱樟芝、牛樟菇、樟內菇、紅樟菇等,是只生長于我國臺灣省牛樟樹( Cinnamomum kanehirai ) 腐朽內壁的多孔真菌[1]。

 

現代研究表明,樟芝含有多糖、三萜、超氧化物歧化酶( SOD) 、腺苷、小分子蛋白質( 含免疫蛋白) 等多種生理活性物質[2-7]。

 

近年來,核苷類成分已被證實是重要的生物活性物質,具有抗驚厥、抗血小板聚集、抗氧化活性[8-9]。作為新興名貴食、藥用菌,目前我國臺灣及日本已有樟芝保健食品上市,並作為食品進口銷往內地市場。

 

迄今,有關牛樟芝的品質研究報導較少,僅見多糖、三萜類成分分析的零星報導,尚未見核苷類成分測定的報導。

 

毛細管電泳原理圖

 

毛細管電泳技術作為一種新型分析技術,兼有電泳和色譜技術的雙重優點,因而具有高效、高速、高靈敏度、高自動化以及樣品和試劑耗用量少等一系列優點[10],已較為廣泛地應用于中藥指標成分含量分析研究[11]。

 

本實驗在前期研究基礎上[12 13],建立HPCE 同時測定牛樟芝中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷5 種核苷類成分含量的方法,並對不同批次商品牛樟芝進行比較分析,為牛樟芝內在品質的綜合評價和全面控制提供可靠的檢測方法。

 

 

1 儀器與材料

儀器  G1600AX 高效毛細管電泳儀( 美國Agilent公司) ,配惠普化學工作站,二極體陣列檢測器( DAD) ,自動進樣器; Anke TGL16B 離心機( 上海安亭科學儀器廠) ; YP601N 電子天平( 上海精密科學儀器有限公司) ; HHS 型水浴鍋( 鞏義市英峪予華儀器廠) ; KQ500B 型超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司,超聲功率500 W) ; pHS3C pH( 上海康儀儀器有限公司)

 

高效毛細管電泳儀(一體機)

 

對照品   腺嘌呤( adenine,批號: 110886-200001) 、腺苷( adenosine,批號: 110879-200202) 、肌苷( inosine,批號: 140669-201104) 、尿苷( uridine,批號: 110887-200202) 購於中國藥品生物製品檢定所;鳥苷( guanosine,批號: 1001103046) 購於美國Sigma公司,純度大於98%。硼砂、氫氧化鈉為分析純,實驗用水均為重蒸餾水。

 

牛樟芝樣品S1 S10 為臺灣某生物科技股份有限公司提供,批號分別為: 02L0702L1102L1402L1802L2102L2502L2803L0403L07 03L11。留樣憑證存放于南京中醫藥大學中藥鑒定實驗室。

 

2 方法與結果

2. 1 電泳條件

 

未塗漬標準熔融石英毛細管75 μm × 64. 5 cm,有效長度56 cm( Agilent 科技有限公司) ; 運行緩衝液: 60 mmol·L 1 硼砂( pH 9. 3) ; 檢測波長: 260 nm;分離電壓: 22 kV; 壓力進樣: 50 mbar × 6 s; 毛細管溫度: 28 ℃。

 

毛細管使用前依次用0. 1 mmol·L 1氫氧化鈉溶液、重蒸餾水和運行緩衝液壓力沖洗5105min,樣品分析間隔用0. 1 mmol·L 1 氫氧化鈉溶液、重蒸餾水、緩衝液平衡355 min。上述試劑使用前均經0. 22 μm 濾膜濾過,並超聲脫氣。

 

2. 2 對照品溶液製備

精密稱定腺嘌呤10. 30 mg,腺苷9. 98 mg,尿苷10. 00 mg,鳥苷8. 08 mg,肌苷10. 24 mg,分別置於10 mL 量瓶中,加水溶解並定容至刻度,得到各對照品母液。

 

分別取腺嘌呤0. 5 mL、腺苷2. 5 mL、尿苷2. 5 mL、鳥苷1. 25 mL 及肌苷0. 625 mL 母液至25mL 量瓶中,加水定容至刻度,製成腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷、肌苷品質濃度分別為20. 699. 8100. 040. 425. 6 μg·mL–1的混合對照品儲備液。

 

2. 3 供試品溶液製備

取經50 ℃乾燥48 h 後的樣品粉末0. 5 g,精密稱定,加蒸餾水5 mL 超聲( 40 kHz 500 W) 提取40 min,沸水加熱10 min 12 000 r·min 1離心8 min,取上清液,用0. 22 μm 濾膜過濾,作為供試品溶液。

 

2. 4 標準曲線、檢測限與定量限

精密吸取混合對照品溶液0. 51234 mL 5 mL 量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,將上述不同濃度混合對照品溶液及混合對照品儲備液進樣測定,以對照品的峰面積( Y) 對相應的品質濃度( ρ) 進行線性回歸,得回歸方程、相關係數及線性範圍;

 

以各化合物的信噪比等於3( S /N = 3) 時的相應濃度確定最低檢測限( LOD) ; 以各化合物的信噪比等於10( S /N = 10) 時的相應濃度確定最低定量限( LOQ) 。結果見表1

 

 

2. 5 系統適用性實驗

在選定的條件下注入供試品溶液,按n = 5. 54( tR /Wh/2) 2分別計算色譜柱理論塔板數n; R = 2( tR2 tR1) /( W1 + W2) 分別計算分離度R。結果表明,理論塔板數、分離度均達到相關要求。結果見表2,圖1

 

1 混合對照品( A) 和牛樟芝樣品( B) HPCE-DAD 色譜圖

Fig. 1 HPCE-DAD Chromatograms of mixed standards( A) andAntrodia camphorate

 

2. 6 方法學考察

精密度實驗:取混合對照品溶液,重複進樣5次,考察日內精密度; 連續3 d,進樣分析考察日間精密度,測得各對照品平均遷移時間、峰面積的相對標準差( RSD) 均分別小於1.34%5.87%

 

穩定性實驗:取供試品( S1) 溶液,分別在1481624 h 進樣5 次,測得5 種核苷的平均遷移時間、峰面積的相對標準差( RSD) 均小於1.18%5.18%

 

重複性實驗:精密稱取供試品( S1) 5 份,每份0. 5 g,分別按供試品溶液製備方法製備供試液,進樣測定,腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷的平均含量分別為18. 111887. 24956. 43749. 28100. 24 μg·g 1 ; RSD 分別為2.38%4. 96%1. 88%2. 67%3. 24%

 

加樣回收率實驗:取已知含量的樣品( S1) 0. 25 g( 5) ,精密稱定,分別精密加入一定量的腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷對照品,按“2. 3”製備方法製備加樣回收供試品液,並按樣品測定方法進行測定,計算回收率,結果表明,腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷的平均回收率分別為98. 83%99. 83%101. 04%99. 65%101. 08%; RSD 分別為3. 18%1. 75%2. 61%2. 82%3. 27%,結果見表3

 

 

2. 7 樣品分析

在選定的電泳優化條件下,將供試品溶液注入高效毛細管電泳儀,進行測定。根據相應線性關係計算樣品中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷的含量。結果見表4

 

 

3 討論

3. 1 泳條件優化

 

緩衝液的選擇:實驗考察了硼砂、硼砂-硼酸、硼砂-甲醇、硼砂-氨水、乙酸鈉-乙酸銨、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉體系的緩衝液,發現選用乙酸鈉-乙酸銨緩衝液或磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩衝液,5 種核苷分離度很差,基本不能分開; 選用硼砂-硼酸液分離效果稍好,但仍有一些峰達不到基線分離; 當選用硼砂-甲醇及硼砂-氨水時,分離效果一般。

 

經反復實驗確定以硼砂為緩衝液,5 種核苷分離效果最好。故選擇硼砂緩衝體系。

 

緩衝液濃度的選擇:實驗考察了60 70mmol·L 1的硼砂緩衝溶液,結果發現,遷移時間和分離度隨著緩衝液濃度的升高而減小。

 

當緩衝液濃度為60 mmol·L 1時,樣品各組分的峰形和分離度較好,故選擇緩衝液的濃度為60 mmol·L 1

 

緩衝液pH 的選擇:緩衝液pH 是影響組分遷移時間及分離度的重要因素,實驗考察了pH 9. 08 9. 30 的緩衝液,發現隨著pH 值的增大,各組分的分離度增加而遷移時間延長,峰高亦增高,當pH 9. 30 5 種核苷組分可達到基線基本分離,樣品各組分分離較好。故選擇緩衝液的pH 9. 30

 

運行電壓的選擇:實驗考察了分離電壓在15 24 kV的條件下對各組分遷移時間的影響,實驗結果表明,分離電壓過小,不能達到很好分離,當分離電壓為22 kV 時樣品中各組分分離度較好,5種核苷可以達到基線分離。故選擇分離電壓為22 kV

 

檢測波長的選擇:採用二極體陣列檢測器對檢測波長進行考察,記錄並比較不同波長的色譜圖,根據分析物的紫外吸收特徵,發現在260 nm 波長處,5種核苷類成分均有較好的吸收,故選擇260 nm 為檢測波長。

 

3. 2 實驗結果分析

含量測定結果表明,不同批次牛樟芝樣品中5種核苷類成分的含量有所差異。腺嘌呤以S1 含量較高,腺苷以S3 含量較高,尿苷以S4S7 含量較高,鳥苷以S3S10 含量較高,肌苷S4S7 含量較高,這可能與培養基質、培養條件等有關。

 

牛樟芝樣品中5 種核苷的含量高低順序總體為: 腺苷> 尿苷> 鳥苷> 肌苷> 腺嘌呤,其核苷含量變化規律仍需要進一步實驗探討。綜上所述,核苷可作為評價牛樟芝品質穩定和均一性的一項重要指標。

 

 

4 結論

本實驗建立了HPCE 同時測定牛樟芝中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷等5 種核苷類成分含量的方法,本方法準確、可靠,重現性較好,可用于牛樟芝內在品質的評價和控制。

 

 

作者  張奉蘇

南京中醫藥大學江蘇省中藥炮製重點實驗室

中國藥學雜誌2013 6 月第48 卷第12

 

參考文獻

1 WU S HRYVAREDN LCHANG T T Antrodia camphorata( “niu-chang-chih”) new combination of a medicinal fungus inTaiwanJ]. Bot Bull Acad Sin199738: 273-275

2 ZHANG D Z Taiwans unique precious medicinal fungus Antrodiacamphorata J]. Edible and Medicinal Mushrooms( 食藥用菌) 201119( 1) : 33-34

3 CHEN T QFANG Z Y Taiwan food ( drugs) with bacteria developmentstatusJ]. Fujian Agric Sci Technol ( 福建農業科技) 2000( 1) : 20-21

4 CHRN CYANG S New steroid acids from Antrodia cinnamomeaa fungal parasite of Cinnamomum micranthumJ]. JNat Prod199558( 11) : 1655-1661

5 CHENG I CHIANG H CHENG Met al Threenew trierpenoidsfrom Antrodia cinnamomea J]. J Nat Prod199558( 3) : 365-371

6 YANG SSHEN YCHEN C Steroids and triterpenoids of Antrodiacinnamomea-A fungus parasitic on Cinnamomum micranthum J].Phytochemietry( 植物化學) 199641( 5) : 1389-1392

7 CHERNG ICHIANG HWU D Triterpenoids from Antrodiacinnamomea J]. Phytochemistry( 植物化學) 199641( 5) :263-267

8 BALLARIN MHERRERA-MARSCHITZ MCASSA Met alStriatal adenosine levels measured in vivo by microdialysis in ratswith unilateral dopamine denervationJ]. Neuroscience Letters( 神經學快報) 198783( 3) : 338-344

9 SCHMIDT A PLARA D RMARASCHIN J Fet al Guanosineand GMP prevent seizures induced by quinolinic acid in miceJ].Brain Res( 腦研究) 2000864( 1) : 40-43

10 XU W CCHU Y JLIN Det al Study on separation performanceof capillary column coated physically with modified HyperbranchedpolycarbosilaneJ]. Chin J Anal Chem( 分析化學) 201038( 8) : 1167-1169

11 SHI C YSUN G XSONG W Capillary eletrophoresis fingerprintsof Radix Scutellariae and determination of baicalin by CZEJ]. Chin Tradit Pat Med( 中成藥) 200830( 4) : 469-472

12 CHEN FLIU X HYANG N Yet al Research Description ofAntrodia camphorataJ]. J Chin Med Mater( 中藥材) 201134( 11) : 1804-1808

13 CHEN FZHANG F SLIU X H et al The preliminary analysisof the quality of Antrodia camphorataJ]. J Chin Med Mater( 中藥材) 201235( 10) 1623-1627.


2017-09-20 張奉蘇 生物技術與健康快訊

牛樟芝( Antrodia camphorata) 又稱樟芝、牛樟菇、樟內菇、紅樟菇等,是只生長于我國臺灣省牛樟樹( Cinnamomum kanehirai ) 腐朽內壁的多孔真菌[1]。

 

現代研究表明,樟芝含有多糖、三萜、超氧化物歧化酶( SOD) 、腺苷、小分子蛋白質( 含免疫蛋白) 等多種生理活性物質[2-7]。

 

近年來,核苷類成分已被證實是重要的生物活性物質,具有抗驚厥、抗血小板聚集、抗氧化活性[8-9]。作為新興名貴食、藥用菌,目前我國臺灣及日本已有樟芝保健食品上市,並作為食品進口銷往內地市場。

 

迄今,有關牛樟芝的品質研究報導較少,僅見多糖、三萜類成分分析的零星報導,尚未見核苷類成分測定的報導。

 

毛細管電泳原理圖

 

毛細管電泳技術作為一種新型分析技術,兼有電泳和色譜技術的雙重優點,因而具有高效、高速、高靈敏度、高自動化以及樣品和試劑耗用量少等一系列優點[10],已較為廣泛地應用于中藥指標成分含量分析研究[11]。

 

本實驗在前期研究基礎上[12 13],建立HPCE 同時測定牛樟芝中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷5 種核苷類成分含量的方法,並對不同批次商品牛樟芝進行比較分析,為牛樟芝內在品質的綜合評價和全面控制提供可靠的檢測方法。

 

 

1 儀器與材料

儀器  G1600AX 高效毛細管電泳儀( 美國Agilent公司) ,配惠普化學工作站,二極體陣列檢測器( DAD) ,自動進樣器; Anke TGL16B 離心機( 上海安亭科學儀器廠) ; YP601N 電子天平( 上海精密科學儀器有限公司) ; HHS 型水浴鍋( 鞏義市英峪予華儀器廠) ; KQ500B 型超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司,超聲功率500 W) ; pHS3C pH( 上海康儀儀器有限公司)

 

高效毛細管電泳儀(一體機)

 

對照品   腺嘌呤( adenine,批號: 110886-200001) 、腺苷( adenosine,批號: 110879-200202) 、肌苷( inosine,批號: 140669-201104) 、尿苷( uridine,批號: 110887-200202) 購於中國藥品生物製品檢定所;鳥苷( guanosine,批號: 1001103046) 購於美國Sigma公司,純度大於98%。硼砂、氫氧化鈉為分析純,實驗用水均為重蒸餾水。

 

牛樟芝樣品S1 S10 為臺灣某生物科技股份有限公司提供,批號分別為: 02L0702L1102L1402L1802L2102L2502L2803L0403L07 03L11。留樣憑證存放于南京中醫藥大學中藥鑒定實驗室。

 

2 方法與結果

2. 1 電泳條件

 

未塗漬標準熔融石英毛細管75 μm × 64. 5 cm,有效長度56 cm( Agilent 科技有限公司) ; 運行緩衝液: 60 mmol·L 1 硼砂( pH 9. 3) ; 檢測波長: 260 nm;分離電壓: 22 kV; 壓力進樣: 50 mbar × 6 s; 毛細管溫度: 28 ℃。

 

毛細管使用前依次用0. 1 mmol·L 1氫氧化鈉溶液、重蒸餾水和運行緩衝液壓力沖洗5105min,樣品分析間隔用0. 1 mmol·L 1 氫氧化鈉溶液、重蒸餾水、緩衝液平衡355 min。上述試劑使用前均經0. 22 μm 濾膜濾過,並超聲脫氣。

 

2. 2 對照品溶液製備

精密稱定腺嘌呤10. 30 mg,腺苷9. 98 mg,尿苷10. 00 mg,鳥苷8. 08 mg,肌苷10. 24 mg,分別置於10 mL 量瓶中,加水溶解並定容至刻度,得到各對照品母液。

 

分別取腺嘌呤0. 5 mL、腺苷2. 5 mL、尿苷2. 5 mL、鳥苷1. 25 mL 及肌苷0. 625 mL 母液至25mL 量瓶中,加水定容至刻度,製成腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷、肌苷品質濃度分別為20. 699. 8100. 040. 425. 6 μg·mL–1的混合對照品儲備液。

 

2. 3 供試品溶液製備

取經50 ℃乾燥48 h 後的樣品粉末0. 5 g,精密稱定,加蒸餾水5 mL 超聲( 40 kHz 500 W) 提取40 min,沸水加熱10 min 12 000 r·min 1離心8 min,取上清液,用0. 22 μm 濾膜過濾,作為供試品溶液。

 

2. 4 標準曲線、檢測限與定量限

精密吸取混合對照品溶液0. 51234 mL 5 mL 量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,將上述不同濃度混合對照品溶液及混合對照品儲備液進樣測定,以對照品的峰面積( Y) 對相應的品質濃度( ρ) 進行線性回歸,得回歸方程、相關係數及線性範圍;

 

以各化合物的信噪比等於3( S /N = 3) 時的相應濃度確定最低檢測限( LOD) ; 以各化合物的信噪比等於10( S /N = 10) 時的相應濃度確定最低定量限( LOQ) 。結果見表1

 

 

2. 5 系統適用性實驗

在選定的條件下注入供試品溶液,按n = 5. 54( tR /Wh/2) 2分別計算色譜柱理論塔板數n; R = 2( tR2 tR1) /( W1 + W2) 分別計算分離度R。結果表明,理論塔板數、分離度均達到相關要求。結果見表2,圖1

 

1 混合對照品( A) 和牛樟芝樣品( B) HPCE-DAD 色譜圖

Fig. 1 HPCE-DAD Chromatograms of mixed standards( A) andAntrodia camphorate

 

2. 6 方法學考察

精密度實驗:取混合對照品溶液,重複進樣5次,考察日內精密度; 連續3 d,進樣分析考察日間精密度,測得各對照品平均遷移時間、峰面積的相對標準差( RSD) 均分別小於1.34%5.87%

 

穩定性實驗:取供試品( S1) 溶液,分別在1481624 h 進樣5 次,測得5 種核苷的平均遷移時間、峰面積的相對標準差( RSD) 均小於1.18%5.18%

 

重複性實驗:精密稱取供試品( S1) 5 份,每份0. 5 g,分別按供試品溶液製備方法製備供試液,進樣測定,腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷的平均含量分別為18. 111887. 24956. 43749. 28100. 24 μg·g 1 ; RSD 分別為2.38%4. 96%1. 88%2. 67%3. 24%

 

加樣回收率實驗:取已知含量的樣品( S1) 0. 25 g( 5) ,精密稱定,分別精密加入一定量的腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷對照品,按“2. 3”製備方法製備加樣回收供試品液,並按樣品測定方法進行測定,計算回收率,結果表明,腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷的平均回收率分別為98. 83%99. 83%101. 04%99. 65%101. 08%; RSD 分別為3. 18%1. 75%2. 61%2. 82%3. 27%,結果見表3

 

 

2. 7 樣品分析

在選定的電泳優化條件下,將供試品溶液注入高效毛細管電泳儀,進行測定。根據相應線性關係計算樣品中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷的含量。結果見表4

 

 

3 討論

3. 1 泳條件優化

 

緩衝液的選擇:實驗考察了硼砂、硼砂-硼酸、硼砂-甲醇、硼砂-氨水、乙酸鈉-乙酸銨、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉體系的緩衝液,發現選用乙酸鈉-乙酸銨緩衝液或磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩衝液,5 種核苷分離度很差,基本不能分開; 選用硼砂-硼酸液分離效果稍好,但仍有一些峰達不到基線分離; 當選用硼砂-甲醇及硼砂-氨水時,分離效果一般。

 

經反復實驗確定以硼砂為緩衝液,5 種核苷分離效果最好。故選擇硼砂緩衝體系。

 

緩衝液濃度的選擇:實驗考察了60 70mmol·L 1的硼砂緩衝溶液,結果發現,遷移時間和分離度隨著緩衝液濃度的升高而減小。

 

當緩衝液濃度為60 mmol·L 1時,樣品各組分的峰形和分離度較好,故選擇緩衝液的濃度為60 mmol·L 1

 

緩衝液pH 的選擇:緩衝液pH 是影響組分遷移時間及分離度的重要因素,實驗考察了pH 9. 08 9. 30 的緩衝液,發現隨著pH 值的增大,各組分的分離度增加而遷移時間延長,峰高亦增高,當pH 9. 30 5 種核苷組分可達到基線基本分離,樣品各組分分離較好。故選擇緩衝液的pH 9. 30

 

運行電壓的選擇:實驗考察了分離電壓在15 24 kV的條件下對各組分遷移時間的影響,實驗結果表明,分離電壓過小,不能達到很好分離,當分離電壓為22 kV 時樣品中各組分分離度較好,5種核苷可以達到基線分離。故選擇分離電壓為22 kV

 

檢測波長的選擇:採用二極體陣列檢測器對檢測波長進行考察,記錄並比較不同波長的色譜圖,根據分析物的紫外吸收特徵,發現在260 nm 波長處,5種核苷類成分均有較好的吸收,故選擇260 nm 為檢測波長。

 

3. 2 實驗結果分析

含量測定結果表明,不同批次牛樟芝樣品中5種核苷類成分的含量有所差異。腺嘌呤以S1 含量較高,腺苷以S3 含量較高,尿苷以S4S7 含量較高,鳥苷以S3S10 含量較高,肌苷S4S7 含量較高,這可能與培養基質、培養條件等有關。

 

牛樟芝樣品中5 種核苷的含量高低順序總體為: 腺苷> 尿苷> 鳥苷> 肌苷> 腺嘌呤,其核苷含量變化規律仍需要進一步實驗探討。綜上所述,核苷可作為評價牛樟芝品質穩定和均一性的一項重要指標。

 

 

4 結論

本實驗建立了HPCE 同時測定牛樟芝中腺嘌呤、腺苷、尿苷、鳥苷及肌苷等5 種核苷類成分含量的方法,本方法準確、可靠,重現性較好,可用于牛樟芝內在品質的評價和控制。

 

 

作者  張奉蘇

南京中醫藥大學江蘇省中藥炮製重點實驗室

中國藥學雜誌2013 6 月第48 卷第12

 

參考文獻

1 WU S HRYVAREDN LCHANG T T Antrodia camphorata( “niu-chang-chih”) new combination of a medicinal fungus inTaiwanJ]. Bot Bull Acad Sin199738: 273-275

2 ZHANG D Z Taiwans unique precious medicinal fungus Antrodiacamphorata J]. Edible and Medicinal Mushrooms( 食藥用菌) 201119( 1) : 33-34

3 CHEN T QFANG Z Y Taiwan food ( drugs) with bacteria developmentstatusJ]. Fujian Agric Sci Technol ( 福建農業科技) 2000( 1) : 20-21

4 CHRN CYANG S New steroid acids from Antrodia cinnamomeaa fungal parasite of Cinnamomum micranthumJ]. JNat Prod199558( 11) : 1655-1661

5 CHENG I CHIANG H CHENG Met al Threenew trierpenoidsfrom Antrodia cinnamomea J]. J Nat Prod199558( 3) : 365-371

6 YANG SSHEN YCHEN C Steroids and triterpenoids of Antrodiacinnamomea-A fungus parasitic on Cinnamomum micranthum J].Phytochemietry( 植物化學) 199641( 5) : 1389-1392

7 CHERNG ICHIANG HWU D Triterpenoids from Antrodiacinnamomea J]. Phytochemistry( 植物化學) 199641( 5) :263-267

8 BALLARIN MHERRERA-MARSCHITZ MCASSA Met alStriatal adenosine levels measured in vivo by microdialysis in ratswith unilateral dopamine denervationJ]. Neuroscience Letters( 神經學快報) 198783( 3) : 338-344

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10 XU W CCHU Y JLIN Det al Study on separation performanceof capillary column coated physically with modified HyperbranchedpolycarbosilaneJ]. Chin J Anal Chem( 分析化學) 201038( 8) : 1167-1169

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